Вот недавняя статья, иллюстрирующая проблему примеси, с которой, держу пари, никто из нас не сталкивался! В ней описывается технологическая работа над противогрибковой молекулой, эфинаконазолом (efinaconazole), который теперь доступен как дженерик. Авторы проверяли чистоту различных партий конечного продукта и постоянно замечали небольшой пик, накладывающийся на желаемый в условиях ЖХ. Они оценили его примерно в 0,06% образцов (он появлялся каждый раз!) и он элюировался немного быстрее, чем реальный препарат.
Это, конечно, нужно было отследить. Стандарт обычно составляет 0,15% для известной примеси и 0,10% для неизвестных. И этот пик слишком приближался к этому порогу. Химические средства снижения его присутствия (различные формы выделения солей, промывки раствора АФИ при разных pH и т.д.) совершенно не изменили количества. Не было никаких изменений в количествах, наблюдаемых в кристаллах по сравнению с "маточным раствором" в экспериментах по кристаллизации, что довольно странно.
Аналитически казалось, что примесь на один дальтон тяжелее исходного соединения, что является настоящей загадкой. Дальнейшая работа с масс-спектрометрией сузила увеличение веса до области пиперидина, но не было никаких доказательств того, что исходный материал пиперидина содержал какую-либо примесь M+1. Все это указывает на то, что проблема находится вне примесей исходных материалов и вне примесей, введенных в процессе синтеза.
Данные масс-спектрометрии высокого разрешения (Orbitrap) показали, что масса точно соответствовала одному дейтерию, замененному на один H в пиперидиновом кольце. Крупномасштабная очистка ВЭЖХ на 100 г эфинаконазола дала 6 мг «чистой примеси», и спектры ЯМР подтвердили отнесение дейтерия. Естественное содержание дейтерия составляет 0,015%, и есть четыре возможных замещения рядом с азотом, что дает вашу примесь 0,06%, выявленную ее очень немного отличающимся физическим поведением. Ой!
Источник: Hacker News · Сводку подготовил HeadlinesBriefing