Now That's an Impurity Story

Here’s a recent paper illustrating an impurity problem that I’ll bet none of us out there have experienced! It describes process work on an antifungal molecule, efinaconazole, which is now available as a generic drug. The authors were checking the purity of various batches of the final product and kept noticing a small peak shouldering the desired one under LC conditions. They estimated it at about 0.06% of the samples (it showed up every time!) and eluted just a bit faster than the real drug.

This of course needed to be tracked down. The standard is generally 0.15% for a known impurity and 0.10% for unknown ones. And this peak was getting too close to that cutoff. Chemical means of lowering its presence did not change the amounts at all. There was no change in the amounts seen in crystals versus the “mother liquor” in crystallization experiments, which is rather odd.

Analytically, it appeared that the impurity was one Dalton heavier than the parent, which is a real puzzler. More mass spec work narrowed down the increased weight to the piperidine region, but there was no evidence that the piperidine starting material had any M+1 impurity. This all points to the problem being outside of starting material impurities and outside of impurities introduced during the synthesis process.

High-resolution (Orbitrap) mass spec data revealed the mass matched exactly one deuterium swapped in for a single H down in the piperidine ring. A large-scale HPLC purification on 100g of efinaconazole produced 6mg of “pure impurity”, and NMR spectra confirmed the deuterium assignment. The natural abundance of deuterium is 0.015%, and there are four possible substitutions next to the nitrogen, giving your 0.06% impurity, revealed by its very slightly different physical behavior. Yikes!

إليكم ورقة بحثية حديثة توضح مشكلة شائبة أراهن أن none منا قد واجهها! تصف العملية على جزيء مضاد للفطريات، إفيناكونازول (efinaconazole)، المتاح الآن كدواء جنيس. كان المؤلفون يفحصون نقاء دفعات مختلفة من المنتج النهائي ولاحظوا باستمرار قمة صغيرة تتاخم القمة المرغوبة تحت ظروف LC. قدروا أنها حوالي 0.06% من العينات (تظهر في كل مرة!) وتنفصل أسرع قليلاً من الدواء الحقيقي.

هذا بالطبع يحتاج إلى تتبعه. المعيار هو عموماً 0.15% للشائبة المعروفة و 0.10% للشائبة غير المعروفة. وكانت هذه القمة تقترب كثيراً من ذلك الحد. الوسائل الكيميائية لتقليل وجودها لم تغير الكميات على الإطلاق. لم يكن هناك تغيير في الكميات التي شوهدت في البلورات مقابل "السائل الأم" في تجارب التبلور، وهو أمر غريب نوعاً ما.

تحليلياً، بدا أن الشائبة أثقل بمقدار دالتون واحد من المركب الأصلي، وهو أمر محير حقاً. عمل مطياف الكتلة الإضافي ضيق نطاق الزيادة في الوزن إلى منطقة البيبيريدين، لكن لم يكن هناك دليل على أن مادة البيبيريدين الأولية تحتوي على أي شائبة M+1. كل هذا يشير إلى أن المشكلة خارج شوائب المواد الأولية وخارج الشوائب التي تم إدخالها أثناء عملية التخليق.

كشفت بيانات مطياف الكتلة عالي الدقة (Orbitrap) أن الكتلة تطابقت تماماً مع استبدال ديوتيريوم واحد مكان H واحد في حلقة البيبيريدين. أنتج تنقية HPLC على نطاق واسع لـ 100g من إفيناكونازول 6mg من "الشائبة النقية"، وأكدت أطياف NMR تعيين الديوتيريوم. الوفرة الطبيعية للديوتيريوم هي 0.015%، وهناك أربعة استبدالات محتملة بجوار النيتروجين، مما يعطيك شائبة 0.06%، التي كشف عنها سلوكها الفيزيائي المختلف قليلاً. ييكس!

এখানে একটি সাম্প্রতিক গবেষণাপত্র যা একটি অশুদ্ধতা সমস্যা চিত্রিত করে যা আমি বাজি ধরে বলতে পারি আমাদের মধ্যে কেউই অনুভব করেনি! এটি একটি অ্যান্টিফাঙ্গাল অণু, এফিনাকোনাজোল (efinaconazole) এর প্রক্রিয়া কাজ বর্ণনা করে, যা এখন একটি জেনেরিক ওষুধ হিসাবে উপলব্ধ। লেখকরা চূড়ান্ত পণ্যের বিভিন্ন ব্যাচের বিশুদ্ধতা পরীক্ষা করছিলেন এবং এলসি অবস্থার অধীনে পছন্দসই শীর্ষের পাশে একটি ছোট শীর্ষ লক্ষ্য করছিলেন। তারা এটি নমুনার প্রায় 0.06% অনুমান করেছিলেন (এটি প্রতিবার দেখা যেত!) এবং এটি আসল ওষুধের চেয়ে কিছুটা দ্রুত নির্গত হত।

এটি অবশ্যই ট্র্যাক করা প্রয়োজন ছিল। একটি পরিচিত অশুদ্ধতার জন্য মান সাধারণত 0.15% এবং অজ্ঞাতগুলির জন্য 0.10%। এবং এই শীর্ষটি সেই সীমার খুব কাছাকাছি পৌঁছাচ্ছিল। এর উপস্থিতি কমানোর রাসায়নিক উপায়গুলি (বিভিন্ন লবণ ফর্ম পৃথকীকরণ, এপিআইয়ের দ্রবণের বিভিন্ন পিএইচ ধোয়া ইত্যাদি) পরিমাণে মোটেও পরিবর্তন আনেনি। স্ফটিকীকরণ পরীক্ষায় স্ফটিক বনাম "মাদার লিকার"-এ দেখা পরিমাণে কোনও পরিবর্তন হয়নি, যা বরং অদ্ভুত।

বিশ্লেষণাত্মকভাবে, মনে হয়েছিল অশুদ্ধতাটি মূল অণুর চেয়ে একটি ডাল্টন ভারী, যা সত্যিই একটি ধাঁধা। আরও মাস স্পেক কাজ পাইপেরিডিন অঞ্চলে বর্ধিত ওজনকে সীমাবদ্ধ করেছিল, কিন্তু পাইপেরিডিন প্রারম্ভিক উপাদানে কোনও M+1 অশুদ্ধতা ছিল তার কোনও প্রমাণ ছিল না। এই সবই ইঙ্গিত দেয় যে সমস্যাটি প্রারম্ভিক উপাদানের অশুদ্ধতা এবং সংশ্লেষণ প্রক্রিয়ার সময় প্রবর্তিত অশুদ্ধতার বাইরে।

উচ্চ-রেজোলিউশন (Orbitrap) মাস স্পেক ডেটা প্রকাশ করেছে যে ভরটি পাইপেরিডিন রিংয়ে একটি H-এর জন্য একটি ডিউটেরিয়াম বিনিময়ের সাথে ঠিক মিলেছে। 100g এফিনাকোনাজোলের একটি বড় আকারের HPLC বিশুদ্ধকরণ 6mg "বিশুদ্ধ অশুদ্ধতা" উৎপন্ন করেছে, এবং NMR স্পেকট্রা ডিউটেরিয়াম নির্ধারণ নিশ্চিত করেছে। ডিউটেরিয়ামের প্রাকৃতিক প্রাচুর্য 0.015%, এবং নাইট্রোজেনের পাশে চারটি সম্ভাব্য প্রতিস্থাপন রয়েছে, যা আপনাকে 0.06% অশুদ্ধতা দেয়, যা এর খুব সামান্য ভিন্ন ভৌত আচরণ দ্বারা প্রকাশিত। ইয়িক্স!

Hier ist eine aktuelle Arbeit, die ein Verunreinigungsproblem veranschaulicht, das, ich wette, keiner von uns erlebt hat! Sie beschreibt Prozessarbeiten an einem Antimykotikum, Efinaconazol, das jetzt als Generikum erhältlich ist. Die Autoren überprüften die Reinheit verschiedener Chargen des Endprodukts und bemerkten stets einen kleinen Peak, der unter LC-Bedingungen den gewünschten überlagerte. Sie schätzten ihn auf etwa 0,06% der Proben (er tauchte jedes Mal auf!) und eluierte etwas schneller als das eigentliche Medikament.

Dies musste natürlich verfolgt werden. Der Standard liegt im Allgemeinen bei 0,15% für eine bekannte Verunreinigung und 0,10% für unbekannte. Und dieser Peak kam diesem Grenzwert zu nahe. Chemische Mittel zur Verringerung seines Vorhandenseins (verschiedene Salztrennung, unterschiedliche pH-Waschungen einer Lösung des API usw.) änderten die Mengen überhaupt nicht. Es gab keine Veränderung der Mengen in Kristallen im Vergleich zur „Mutterlauge“ in Kristallisationsexperimenten, was ziemlich seltsam ist.

Analytisch schien die Verunreinigung ein Dalton schwerer als die Ausgangssubstanz zu sein, was ein echtes Rätsel ist. Weitere Massenspektrometrie-Arbeiten grenzten die Gewichtszunahme auf die Piperidinregion ein, aber es gab keine Hinweise darauf, dass das Piperidin-Ausgangsmaterial eine M+1-Verunreinigung aufwies. Dies alles deutet darauf hin, dass das Problem außerhalb der Ausgangsmaterialverunreinigungen und außerhalb der während des Syntheseprozesses eingeführten Verunreinigungen liegt.

Hochauflösende (Orbitrap) Massenspektrometrie-Daten zeigten, dass die Masse genau einem Deuterium entsprach, das gegen ein einzelnes H im Piperidinring ausgetauscht wurde. Eine groß angelegte HPLC-Reinigung von 100g Efinaconazol ergab 6mg „reine Verunreinigung“, und NMR-Spektren bestätigten die Deuteriumzuordnung. Die natürliche Häufigkeit von Deuterium beträgt 0,015%, und es gibt vier mögliche Substitutionen neben dem Stickstoff, was Ihre 0,06% Verunreinigung ergibt, die durch ihr sehr leicht unterschiedliches physikalisches Verhalten offenbart wird. Huch!

¡Aquí hay un artículo reciente que ilustra un problema de impureza que apuesto que ninguno de nosotros ha experimentado! Describe el trabajo de proceso sobre una molécula antifúngica, efinaconazol, que ahora está disponible como medicamento genérico. Los autores estaban verificando la pureza de varios lotes del producto final y notaban constantemente un pequeño pico que se superponía al deseado en condiciones de LC. Lo estimaron en aproximadamente 0.06% de las muestras (¡aparecía cada vez!) y eluía un poco más rápido que el fármaco real.

Esto, por supuesto, necesitaba ser investigado. El estándar es generalmente 0.15% para una impureza conocida y 0.10% para las desconocidas. Y este pico se estaba acercando demasiado a ese límite. Los medios químicos para reducir su presencia no cambiaron las cantidades en absoluto. No hubo cambio en las cantidades observadas en cristales versus el "licor madre" en experimentos de cristalización, lo cual es bastante extraño.

Analíticamente, parecía que la impureza era un Dalton más pesada que el compuesto original, lo cual es un verdadero enigma. Más trabajo de espectrometría de masas redujo el aumento de peso a la región de la piperidina, pero no hubo evidencia de que el material de partida de piperidina tuviera alguna impureza M+1. Todo esto apunta a que el problema está fuera de las impurezas del material de partida y fuera de las impurezas introducidas durante el proceso de síntesis.

Los datos de espectrometría de masas de alta resolución (Orbitrap) revelaron que la masa coincidía exactamente con un deuterio intercambiado por un solo H en el anillo de piperidina. Una purificación por HPLC a gran escala de 100g de efinaconazol produjo 6mg de "impureza pura", y los espectros de RMN confirmaron la asignación de deuterio. La abundancia natural de deuterio es 0.015%, y hay cuatro sustituciones posibles junto al nitrógeno, lo que da su impureza del 0.06%, revelada por su comportamiento físico ligeramente diferente. ¡Caramba!

Voici un article récent illustrant un problème d'impureté que je parie qu'aucun d'entre nous n'a expérimenté ! Il décrit le travail de procédé sur une molécule antifongique, l'éfinaconazole, désormais disponible comme médicament générique. Les auteurs vérifiaient la pureté de divers lots du produit final et remarquaient constamment un petit pic chevauchant celui désiré dans des conditions de CL. Ils l'ont estimé à environ 0,06% des échantillons (il apparaissait à chaque fois !) et il s'éluait un peu plus vite que le vrai médicament.

Cela devait bien sûr être traqué. La norme est généralement de 0,15% pour une impureté connue et de 0,10% pour les inconnues. Et ce pic se rapprochait trop de ce seuil. Les moyens chimiques pour réduire sa présence n'ont pas du tout changé les quantités. Il n'y avait aucun changement dans les quantités observées dans les cristaux par rapport à la "liqueur mère" dans les expériences de cristallisation, ce qui est plutôt étrange.

Analytiquement, il semblait que l'impureté était un Dalton plus lourde que le parent, ce qui est une véritable énigme. Davantage de travail de spectrométrie de masse a réduit l'augmentation de poids à la région de la pipéridine, mais il n'y avait aucune preuve que le matériau de départ pipéridine contenait une impureté M+1. Tout cela indique que le problème est en dehors des impuretés des matières premières et en dehors des impuretés introduites pendant le processus de synthèse.

Les données de spectrométrie de masse haute résolution (Orbitrap) ont révélé que la masse correspondait exactement à un deutérium échangé contre un seul H dans le cycle pipéridine. Une purification HPLC à grande échelle sur 100g d'éfinaconazole a produit 6mg d'"impureté pure", et les spectres RMN ont confirmé l'attribution du deutérium. L'abondance naturelle du deutérium est de 0,015%, et il y a quatre substitutions possibles près de l'azote, donnant votre impureté à 0,06%, révélée par son comportement physique très légèrement différent. Ouille !

यहाँ एक हालिया पेपर है जो एक अशुद्धता समस्या को दर्शाता है जिसका अनुभव मुझे यकीन है कि हममें से किसी ने नहीं किया होगा! यह एक एंटीफंगल अणु, एफिनाकोनाज़ोल (efinaconazole) पर प्रक्रिया कार्य का वर्णन करता है, जो अब एक जेनेरिक दवा के रूप में उपलब्ध है। लेखक अंतिम उत्पाद के विभिन्न बैचों की शुद्धता की जाँच कर रहे थे और एलसी स्थितियों के तहत वांछित शिखर के साथ एक छोटी चोटी लगातार देख रहे थे। उन्होंने इसका अनुमान नमूनों के लगभग 0.06% लगाया (यह हर बार दिखाई देती थी!) और यह वास्तविक दवा की तुलना में थोड़ा तेज़ी से बाहर निकलती थी।

यह निश्चित रूप से ट्रैक किए जाने की आवश्यकता थी। एक ज्ञात अशुद्धता के लिए मानक आमतौर पर 0.15% और अज्ञात के लिए 0.10% होता है। और यह चोटी उस सीमा के बहुत करीब पहुँच रही थी। इसकी उपस्थिति को कम करने के रासायनिक साधनों (विभिन्न नमक रूप पृथक्करण, एपीआई के घोल के विभिन्न पीएच धुलाई आदि) से मात्रा में बिल्कुल भी बदलाव नहीं आया। क्रिस्टलीकरण प्रयोगों में क्रिस्टल बनाम "मदर लिकर" में देखी गई मात्रा में कोई बदलाव नहीं था, जो काफी अजीब है।

विश्लेषणात्मक रूप से, ऐसा प्रतीत हुआ कि अशुद्धता मूल अणु से एक डाल्टन भारी थी, जो एक वास्तविक पहेली है। अधिक मास स्पेक कार्य ने बढ़े हुए वजन को पाइपरिडीन क्षेत्र तक सीमित कर दिया, लेकिन इसका कोई सबूत नहीं था कि पाइपरिडीन प्रारंभिक सामग्री में कोई M+1 अशुद्धता थी। यह सब इंगित करता है कि समस्या प्रारंभिक सामग्री अशुद्धियों और संश्लेषण प्रक्रिया के दौरान शुरू की गई अशुद्धियों के बाहर है।

उच्च-रिज़ॉल्यूशन (Orbitrap) मास स्पेक डेटा ने खुलासा किया कि द्रव्यमान बिल्कुल पाइपरिडीन रिंग में एक H के लिए एक ड्यूटेरियम के आदान-प्रदान से मेल खाता है। 100g एफिनाकोनाज़ोल पर एक बड़े पैमाने पर एचपीएलसी शुद्धिकरण ने 6mg "शुद्ध अशुद्धता" उत्पन्न की, और एनएमआर स्पेक्ट्रा ने ड्यूटेरियम असाइनमेंट की पुष्टि की। ड्यूटेरियम की प्राकृतिक प्रचुरता 0.015% है, और नाइट्रोजन के बगल में चार संभावित प्रतिस्थापन हैं, जो आपको 0.06% अशुद्धता देते हैं, जो इसके बहुत थोड़े अलग भौतिक व्यवहार से प्रकट होती है। यिक्स!

Ini adalah makalah terbaru yang menggambarkan masalah pengotor yang saya yakin tidak ada di antara kita yang pernah mengalaminya! Makalah ini menjelaskan pekerjaan proses pada molekul antijamur, efinakonazol (efinaconazole), yang kini tersedia sebagai obat generik. Para penulis memeriksa kemurnian berbagai batch produk akhir dan terus-menerus melihat puncak kecil yang berhimpitan dengan puncak yang diinginkan dalam kondisi LC. Mereka memperkirakannya sekitar 0,06% dari sampel (muncul setiap saat!) dan terelusi sedikit lebih cepat daripada obat asli.

Ini tentu saja perlu dilacak. Standarnya umumnya 0,15% untuk pengotor yang diketahui dan 0,10% untuk yang tidak diketahui. Dan puncak ini semakin mendekati batas tersebut. Cara kimia untuk menurunkan keberadaannya (isolasi bentuk garam yang berbeda, pencucian larutan API dengan pH berbeda, dll.) sama sekali tidak mengubah jumlahnya. Tidak ada perubahan dalam jumlah yang terlihat pada kristal versus "induk cairan" dalam eksperimen kristalisasi, yang agak aneh.

Secara analitis, tampaknya pengotor tersebut satu Dalton lebih berat dari senyawa induk, yang merupakan teka-teki nyata. Lebih banyak pekerjaan spek massa mempersempit peningkatan berat ke daerah piperidina, tetapi tidak ada bukti bahwa bahan awal piperidina memiliki pengotor M+1. Semua ini menunjukkan bahwa masalahnya berada di luar pengotor bahan awal dan di luar pengotor yang diperkenalkan selama proses sintesis.

Data spek massa resolusi tinggi (Orbitrap) mengungkapkan bahwa massa tersebut tepat cocok dengan satu deuterium yang ditukar dengan satu H di dalam cincin piperidina. Pemurnian HPLC skala besar pada 100g efinakonazol menghasilkan 6mg "pengotor murni", dan spektrum NMR mengonfirmasi penugasan deuterium. Kelimpahan alami deuterium adalah 0,015%, dan ada empat substitusi yang mungkin di samping nitrogen, menghasilkan pengotor 0,06% Anda, yang terungkap oleh perilaku fisiknya yang sangat sedikit berbeda. Ya ampun!

ここに、私たちの誰も経験したことがないであろう不純物問題を示す最近の論文があります！これは、現在ジェネリック医薬品として入手可能な抗真菌分子エフィナコナゾール（efinaconazole）のプロセス研究を説明しています。著者らは最終製品のさまざまなバッチの純度をチェックしており、LC条件下で目的のピークに肩を持つ小さなピークに気づき続けました。彼らはそれをサンプルの約0.06%と推定し（毎回現れました！）、実際の薬剤よりも少し速く溶出しました。

これはもちろん追跡する必要がありました。既知の不純物の基準は一般的に0.15%、未知のものは0.10%です。そしてこのピークはその閾値に近づきすぎていました。その存在を減らす化学的手段（異なる塩形の単離、API溶液の異なるpH洗浄など）は量をまったく変えませんでした。結晶化実験における結晶と「母液」で見られる量に変化はなく、これはかなり奇妙です。

分析的に、不純物は親分子より1ダルトン重いように見え、これは本当の謎です。さらなる質量分析作業により、重量増加はピペリジン領域に絞り込まれましたが、ピペリジン出発原料にM+1不純物があるという証拠はありませんでした。これはすべて、問題が出発原料の不純物や合成プロセス中に導入された不純物の外側にあることを示しています。

高分解能（Orbitrap）質量分析データにより、質量がピペリジン環内の1つのHと交換された1つの重水素と正確に一致することが明らかになりました。100gのエフィナコナゾールの大規模HPLC精製により6mgの「純粋な不純物」が生成され、NMRスペクトルにより重水素の帰属が確認されました。重水素の天然存在比は0.015%であり、窒素の隣に4つの可能な置換位置があり、0.06%の不純物が得られ、その非常にわずかに異なる物理的挙動によって明らかになります。うわっ！

Aqui está um artigo recente ilustrando um problema de impureza que aposto que nenhum de nós experimentou! Descreve o trabalho de processo em uma molécula antifúngica, efinaconazol, agora disponível como medicamento genérico. Os autores estavam verificando a pureza de vários lotes do produto final e notavam constantemente um pequeno pico sobrepondo o desejado sob condições de LC. Eles estimaram em cerca de 0,06% das amostras (aparecia toda vez!) e eluía um pouco mais rápido que o fármaco real.

Isso, claro, precisava ser rastreado. O padrão é geralmente 0,15% para uma impureza conhecida e 0,10% para desconhecidas. E este pico estava chegando muito perto desse limite. Meios químicos de reduzir sua presença não alteraram as quantidades. Não houve mudança nas quantidades vistas em cristais versus o "licor mãe" em experimentos de cristalização, o que é bastante estranho.

Analiticamente, parecia que a impureza era um Dalton mais pesada que o composto original, o que é um verdadeiro enigma. Mais trabalho de espectrometria de massas reduziu o aumento de peso à região da piperidina, mas não houve evidência de que o material de partida piperidina tivesse qualquer impureza M+1. Tudo isso aponta para o problema estar fora das impurezas do material de partida e fora das impurezas introduzidas durante o processo de síntese.

Dados de espectrometria de massas de alta resolução (Orbitrap) revelaram que a massa correspondia exatamente a um deutério trocado por um único H no anel piperidina. Uma purificação por HPLC em larga escala de 100g de efinaconazol produziu 6mg de "impureza pura", e espectros de RMN confirmaram a atribuição do deutério. A abundância natural de deutério é 0,015%, e há quatro substituições possíveis junto ao nitrogênio, dando sua impureza de 0,06%, revelada por seu comportamento físico ligeiramente diferente. Ufa!

Вот недавняя статья, иллюстрирующая проблему примеси, с которой, держу пари, никто из нас не сталкивался! В ней описывается технологическая работа над противогрибковой молекулой, эфинаконазолом (efinaconazole), который теперь доступен как дженерик. Авторы проверяли чистоту различных партий конечного продукта и постоянно замечали небольшой пик, накладывающийся на желаемый в условиях ЖХ. Они оценили его примерно в 0,06% образцов (он появлялся каждый раз!) и он элюировался немного быстрее, чем реальный препарат.

Это, конечно, нужно было отследить. Стандарт обычно составляет 0,15% для известной примеси и 0,10% для неизвестных. И этот пик слишком приближался к этому порогу. Химические средства снижения его присутствия (различные формы выделения солей, промывки раствора АФИ при разных pH и т.д.) совершенно не изменили количества. Не было никаких изменений в количествах, наблюдаемых в кристаллах по сравнению с "маточным раствором" в экспериментах по кристаллизации, что довольно странно.

Аналитически казалось, что примесь на один дальтон тяжелее исходного соединения, что является настоящей загадкой. Дальнейшая работа с масс-спектрометрией сузила увеличение веса до области пиперидина, но не было никаких доказательств того, что исходный материал пиперидина содержал какую-либо примесь M+1. Все это указывает на то, что проблема находится вне примесей исходных материалов и вне примесей, введенных в процессе синтеза.

Данные масс-спектрометрии высокого разрешения (Orbitrap) показали, что масса точно соответствовала одному дейтерию, замененному на один H в пиперидиновом кольце. Крупномасштабная очистка ВЭЖХ на 100 г эфинаконазола дала 6 мг «чистой примеси», и спектры ЯМР подтвердили отнесение дейтерия. Естественное содержание дейтерия составляет 0,015%, и есть четыре возможных замещения рядом с азотом, что дает вашу примесь 0,06%, выявленную ее очень немного отличающимся физическим поведением. Ой!

这里有一篇近期论文，展示了一个我敢打赌我们中没人经历过的杂质问题！它描述了抗真菌分子依非康唑（efinaconazole）的工艺工作，该药现已作为仿制药上市。作者在检查最终产品各批次纯度时，不断注意到在液相色谱条件下，目标峰旁有一个小肩峰。他们估计其约占样品的0.06%（每次都出现！），且洗脱速度比真药稍快。

这当然需要追查。已知杂质的标准通常是0.15%，未知杂质为0.10%。而这个峰正接近该阈值。通过化学方法降低其含量（如不同盐形式分离、原料药溶液不同pH洗涤等）完全没有改变其量。结晶实验中晶体与“母液”中的量也没有变化，这相当奇怪。

分析上，该杂质似乎比母体重一个道尔顿（一个原子质量单位），这真是个谜。更多质谱工作将增重缩小到哌啶区域，但没有证据表明哌啶起始原料含有任何M+1杂质。这一切都表明问题不在起始原料杂质，也不在合成过程中引入的杂质。

高分辨率（Orbitrap）质谱数据显示，质量恰好匹配哌啶环中一个氢被一个氘取代。对100g依非康唑进行大规模HPLC纯化，得到6mg“纯杂质”，NMR谱确认了氘的归属。氘的天然丰度为0.015%，氮旁有四个可能的取代位置，因此得到0.06%的杂质，由其非常轻微的物理行为差异揭示。哎呀！